Katalog

B İ L G İ S A Y A R V E L A S E R T E K N O L O J İ S İ Yeni MP miknoskobik göpüntiileme Optik mikroskop ile bilgisayar ve laser teknolojisinin birleşiminden doğan bir mikroskobik görüntüleme sistemi: "Konfokal laser tarama mikroskobu". AlpCan* K lasık ışık mıkroskobunun görüntü kalitesı ve çözüm gücü (rezolüsyon) sınırlarını belirleyen en önemli faktörler arasında, kullanılan ışığın kompozıt ışık oluşu yani genış bir dalga boyu aralığında ışıması ve incelenen spesimenın kalınlığından kaynaklanan odakdışı ışınlar sayılabılır. Bu iki faktör, özellikle küçük veya kalın obıelerin yeterince iyi gözlenememesine neden olur. Bu iki problemden yola çıkarak, 1970'li yılların sonunda, ılk olarak nokta diyafram ve elektrikli netlik ayar düzenekleri gelıştırılmıştir. Amaç, ışığı çok küçük (1050 mıkrometre çapında) bir delıkten geçırerek, yüksek bir tarama hızıyla, ıncelenecek spesimenin yalnız bir düzlemındekı yapıları görüruülemek, boylece odakdışı ışınları görüntü dışı bırakmaktı. Söz konusu düzenektekı iki merkezlı döner nokta diyafram (Nipkov dıski) nedeniyle bu yenı mıkroskobun adı "konfokal mikroskobu" olarak benimsendi. Bu parlak düşünce birkaç yıl içinde uyulamaya konmakla birlikte kullanımı zor ve pratık olmaktan uzaktı. O nedenle, ticari olarak pek yer edınemedı Ancak tam o yıllarda (198586) yanı laser ışını teknolojisinin artık günlük yaşama iyıce girdıği günlerde konvansıyonel fılaman tipi ışık kaynağının yerini tek dalga boyuna sahip laser ışık kaynakları almaya başladı. Boylece, ulaşılmak ıstenen hedef, yani nokta ışık kaynağı elde edilmış oldu. Bu dönemde, konfokal mıkroskobun adı "laser taramalı konfokal mikroskobu" olarak değışmeye, teknolojık sloganı ise "nokta dıyaframnokta ışık kaynağı" olarak belırlemeye başlamıştı. Böylece, bir spesimenin ıstenen duzleminden optik kesit almak olası hale geldi. Bu noktadan sonra belırlenen hedef, elde edılen çok sayıdakı optik kesıtın bıraraya getırılmesıydı. Böylece, x ve y aksında alınan görüntüye bir de z aksı eklenecekti. Bu düzenek ıle bir bütünün tüm yapısı ardışık görüntülerle ortaya konabı Iki hücreli aşamadaki fare embriyonu. Fluorescein ile işaretlenmiş falloidinin doğrudan uygulanmasıyla fibriler aktin (yeşil sinyal) ve fluoresans insitu hibridizasyon yöntemiyle ile poliA kuyruklu RNA moleküllerinin (kırmızı sinyal) yerleşimleri izlenmektedir. Kültüre edilmiş bir insan granüloza hücresi. Mikrotübülüsler, indirekt immünofluoresans yöntemiyle antitübülin antikoru ile işaretlenmiş, elde edilen siyahbeyaz görüntü konfokal mikroskobuna bağlı görüntü analizi sistemine aktarıldıktan sonra bilgisayar tarafından gri tonları eksponansiyel olarak renklendirilmiştir. Vücut dışında olgunlaştırılmış (in vitro matürasyon) ve döllenmeye karşı bir maymun yumurta hücresinde (kutup cisimciği altta görülmektedir) fluorescein ile işaretlenmiş falloidinin doğrudan uygulanması ile fibriler aktin izlenmektedir. Söz konusu görüntü, 0.5 mikrometre aralıklı 220 optik kesitın biraraya getirilip gerekli filtreleme ve rtmklendirme işlemleri sonucunda elde edilmiştir. 4386